REACCIóN EN CADENA DE LA POLIMERASA (PCR): DESCRIPCIóN DEL MéTODO

La reacción en cadena de la polimerasa (PCR) es la creación de múltiples copias de una sección corta del ADN humano. Se necesita una pequeña cantidad de material fisiológico para investigar y obtener resultados: esputo, sangre, líquido amniótico, saliva, orina, etc.

¿Qué es una reacción en cadena de la polimerasa?

El método de PCR fue desarrollado por el científico estadounidense Melison, quien ganó el Premio Nobel en 1998 por su desarrollo. Utilizado activamente:

Con el diagnóstico precoz de infecciones, patologías oncológicas;
en un examen forense para el estudio de una cantidad extremadamente pequeña de ADN;
en veterinaria, biología, genética molecular;
para identificación personal por ADN;
para confirmar la paternidad;
en ecología, por ejemplo, al rastrear la calidad del producto, en antropología.

¿A quién se prescribe la PCR?

La reacción en cadena de la polimerasa en el diagnóstico de patologías infecciosas es uno de los métodos más confiables que brinda el análisis más preciso y confiable. Por ejemplo, la fiabilidad del análisis de la clamidia es cercana al 100%. La mayoría de las veces, esta medida de diagnóstico se prescribe a los pacientes que, durante la prueba, tienen dificultades para identificar un patógeno en particular.

Las pruebas de laboratorio de PCR utilizan:

Para buscar los organismos patógenos que causan la infección del tracto urinario y genital, es difícil de identificar cuando se aplican cultivos o métodos de inmunología.
Para volver a analizar el VIH en la etapa inicial con un resultado positivo pero cuestionable del análisis inicial, por ejemplo, en recién nacidos de padres infectados.
Establecer la patología oncológica en una etapa temprana y para la corrección individual del régimen de tratamiento en pacientes.
Para la detección precoz y tratamiento potencial de patologías hereditarias. Entonces, muchos futuros padres están haciendo pruebas para descubrir si son portadores de enfermedades genéticas. En los niños, este método determina la probabilidad de exposición a enfermedades hereditarias.

Además, se utiliza esta técnica:

para la detección de patología fetal en el embarazo precoz;
en pacientes antes de la cirugía para el trasplante de órganos: necesario para determinar la compatibilidad de los tejidos
para detectar patógenos peligrosos en la sangre del donante;
en recién nacidos para detectar infecciones ocultas;
Evaluar los resultados del tratamiento antiviral o antimicrobiano.

¿Por qué pasar por este procedimiento?

Dado que se considera que la PCR es un método de diagnóstico altamente efectivo que da resultados de casi el 100%, se utiliza este procedimiento:

Para confirmar o excluir el diagnóstico.
Para una evaluación rápida de la efectividad del tratamiento.
En muchos casos, este método se considera la única forma posible de detectar patologías en desarrollo, si otras técnicas virológicas y bacteriológicas han resultado ser inútiles.
Los virus que utilizan el procedimiento de PCR se detectan inmediatamente después de la infección y antes del inicio de los síntomas principales.
La detección temprana de microorganismos permitirá un tratamiento rápido.

Además, el análisis de PCR le permitirá detectar rápidamente un pequeño número de microorganismos en muestras vivas o muertas. Por lo tanto, esta técnica se utiliza para buscar un organismo patógeno específico, por ejemplo, un bacilo tuberculoso.

Además, se utiliza el análisis por PCR:

para determinar la sensibilidad del ADN a tipos específicos de antibióticos, lo que permitirá comenzar lo antes posible el tratamiento;
para controlar la propagación de epidemias;
Para identificar y rastrear nuevos tipos de microbios, patógenos.

Los principales tipos de PCR.

Metodo estandar

El análisis de la PCR se lleva a cabo sobre la base de la duplicación múltiple de un fragmento de ADN específico y ARN utilizando las enzimas cebadoras. Gracias a esto, el investigador recibe la cantidad requerida de material.

PCR en tiempo real

En este tipo de investigación, el proceso de identificación de un fragmento dado se inicia después de pasar por cada ciclo. Este tipo de investigación permite obtener información sobre el número de virus y microorganismos en el cuerpo, es decir, realizar un análisis cuantitativo.

Modo de transcripción inversa de PCR

Este análisis se utiliza para buscar ARN monocatenario para la detección adicional de virus cuya base genética se denomina ARN. Por ejemplo, este es el virus de la hepatitis C, inmunodeficiencia, etc. Al realizar este estudio, se utiliza una enzima especial, gracias a la cual se construye el ADN de una sola hebra. El sistema restaura la segunda hebra de ADN y realiza el procedimiento tradicional.

Indicaciones para

El procedimiento de PCR se utiliza en las clínicas de enfermedades infecciosas, obstetricia, urología, ginecología y nefrología, pediatría, etc. Las indicaciones más comunes para el análisis de la asignación son las siguientes:

para determinar el riesgo de desarrollar anomalías genéticas en un niño en presencia de patologías hereditarias;
para diagnosticar a ambos padres cuando planifican un embarazo o cuando la madre se encuentra en una condición difícil cuando está embarazada de un niño;
con las dificultades de concepción para identificar las causas de la infertilidad;
en caso de sospecha de infecciones sexuales en la etapa aguda o en riesgo de su transición a la etapa crónica;
Detectar las causas de procesos inflamatorios de origen desconocido.
con el sexo casual sin protección;
para determinar la sensibilidad de un microorganismo patógeno a un fármaco específico;
sospecha de infección latente para detectar patógenos sin síntomas evidentes;
Para confirmar la recuperación de una enfermedad, es decir, un diagnóstico retrospectivo.

Además, la PCR se utiliza cuando es necesario identificar con precisión patógenos como: virus de la hepatitis, inmunodeficiencia humana, citomegalovirus, virus del herpes simple, virus de la rubéola, virus del papiloma.

Allí, este método se utiliza para determinar infecciones: mononucleosis infecciosa, encefalitis transmitida por garrapatas, candidiasis, que es causada por hongos candida, infecciones genitales y tuberculosis.

¿Si contraindicaciones y método seguro?

Dado que este procedimiento se lleva a cabo sin ningún impacto en el cuerpo, y solo se utiliza material biológico, que se toma para la investigación, no hay contraindicaciones debido a la ausencia de un peligro potencial para el cuerpo. Pero, por ejemplo, el muestreo de biomaterial del canal cervical del útero no se realiza después de una colposcopia. Frotis de entrega, se permiten raspaduras solo 4-7 días después del final de la menstruación y el cese completo del alta.

Características de preparación para el procedimiento.

Como muestra para análisis de PCR, en la que se detecta el ADN de un patógeno extraño, se utiliza un fluido biológico o un tejido. La ingesta de la sustancia de ensayo se realiza en forma de muestras de sangre de una vena, un raspado de la cavidad nasal, laringe, cérvix y uretra. Antes del procedimiento de diagnóstico, el médico debe explicar al paciente qué material se tomará:

En el análisis de las infecciones por herpes, la mononucleosis se analiza la orina, así como un frotis de la faringe.
cuando se realizan pruebas de hepatitis o toxoplasmosis, se extrae sangre de una vena;
Para diagnosticar varios tipos de daño del SNC, se toma el líquido cefalorraquídeo;
En neumología, las muestras para el análisis de PCR son líquido pleural y esputo;
Si se realiza un estudio de infecciones intrauterinas durante el embarazo, se utilizarán para análisis las células placentarias del líquido amniótico.

La fiabilidad y la precisión del resultado dependen de la esterilidad y las condiciones de tomar el biomaterial. Dado que los estudios de PCR son muy sensibles, cualquier contaminación de la sustancia tomada puede distorsionar los resultados. La preparación competente para el suministro del biomaterial no plantea ninguna dificultad para el paciente.

Pero hay una serie de recomendaciones:

al analizar las infecciones de transmisión sexual, es necesario excluir a los contactos íntimos tres días antes de la entrega del material;
72 horas debe dejar el uso de cualquier preparación vaginal;
A partir de la tarde del día anterior, no se puede realizar la higiene de las áreas estudiadas.
3-4 horas antes de tomar una muestra de la uretra, se debe excluir la micción;
un mes antes de tomar las pruebas, debe dejar de tomar antibióticos;
La sangre se administra por la mañana con el estómago vacío antes de comer y beber;
La orina de la mañana se recoge en un recipiente estéril después de ir al baño.

¿Cómo es la PCR?

Cuando se realiza una investigación en un reactor especial, se repite un ciclo determinado:

El primer paso. Desnaturalización. Se colocan muestras de saliva, sangre, ginecológicas y otras sustancias en el aplicador, donde el material se calienta y el ADN se divide en dos cadenas.
El segundo paso. Ligero enfriamiento de la sustancia tomada, que le agrega componentes especiales que reconocen las partes necesarias de la molécula de DTC y se unen a ella.
3 pasos. Alargamiento Durante el proceso, se completa un fragmento de DTC del organismo patógeno, se forma una copia del mismo. Este ciclo se repite, lo que duplica la copia del fragmento de ADN específico.

En un par de horas, se forman muchas copias de este fragmento, se revela su presencia en las muestras. Luego, los resultados se comparan con las bases de datos de varios tipos de patógenos. Esto le permite determinar el tipo de infección.

¿Características del análisis de decodificación?

El resultado final del estudio se entregará al paciente varios días después del análisis biológico.

Análisis cualitativo

Un resultado negativo en este caso significa que no se detectó ningún agente infeccioso en el fluido que se envió para la prueba. Un resultado positivo indica la detección de virus o bacterias patógenos en una muestra biológica. Si el resultado fue positivo, pero al mismo tiempo que la persona no tiene signos de activación de la infección, tal condición del cuerpo se denomina portadora sana asintomática.

Más a menudo, esto se observa cuando se toma el biomaterial en patologías virales. En este caso, no se requiere tratamiento, pero requiere supervisión médica constante. Dado que bajo tales condiciones hay una probabilidad:

la propagación del virus del portador a personas sanas;
Activación del proceso y transición de la patología a la forma crónica.

Analisis cuantitativo

El resultado cuantitativo es determinado por un especialista específicamente para un tipo particular de infección. Sobre la base de los resultados obtenidos, es posible evaluar el grado de desarrollo, la etapa de la patología, lo que hace posible prescribir el tratamiento lo más rápido posible.